PEMBUATAN MEDIA PENYUBUR

ne minna-san! kali ni mau bagi-bagi cara buat beberapa media penyubur..
Media Penyuburnya, antara lain :

• Pembuatan Media Cair BGLB
• Pembuatan Media Cair EC Broth
• Pembuatan Media Nutrient Broth
• Pembuatan Media Selenite Broth

Naa,,, akan dijabarkan mulai dari alat yang diperlukan, bahan yang digunakan, cara pembuatannya, sampai pembahasan dan ngga ketinggalan perhitungan bahan yang akan digunakan!!!

so... check this out!!!

          I.          Pembuatan Media BGLB

A.      Judul                  :      Pembutan Media Cair BGLB

B.      Hari/Tanggal     :      Senin, 27 September 2010

C.      Tujuan               :      Agar mahasiswa mampu untuk membuat Media Cair BGLB

                                 (Brilliant Green Bile) 40gr/L. 300 ml

D.     Alat                    :

1.    Neraca Analitik

2.    Sendok

3.    Kertas

4.    Hot plate

5.    Magnetic Stirrer

6.    Gelas Ukur

7.    Filler Pipet

8.    Beaket glass

9.    Kapas

10.      Tabung Reaksi

11.      Tabung Durham

12.      Indikator Strip

13.      Kertas

14.      Autoclave

15.      Tali Panjang

E.      Bahan                :     

                                                                          I.            BGLB                                         pH 7,2 ± 0,2 at 35 c

 Komposisi : Peptone 10,0 ; Laktosa 10,0 ; Oxgall 20,0 ; Brilliant Green 0,0133 ; Distilled Water 1,0L

                                                                        II.            Aquades

F.       Cara Kerja         :

Ø Perhitungan

                           ·        BGLB     :    40 x 330:1000 = 13,2 gram

Ø Pembuatan Media

·         Timbang media BGLB 13,2gr menggunakan timbangan elektrik.

·         Ukur aquades sebanyak 330ml dengan menggunakan gelas ukur.

·         Masukkan media BGLB ke dalam beaker glass dan tambahkan aquades yang telah di ukur.

·         Larutkan di hot plate dengan memasukkan magnetic stirrer agar semua bahan tercampur rata (suhu air 20c dan Speed 25).

·         Setelah tercampur sempurna, masukkan ke dalam tabung reaksi dengan menggunakan filler pipet (masing – masing berisi 5ml).

·         Lalu tutup semua tabung reaksi yang telah terisi media BGLB dengan kapas.

·         Bungkus semua kumpulan tabung dengan kertas, ikat dengan tali panjang dan beri indikator strip di bungkusan tabung tersebut.

·         Masukkan di dalam autoclave dan tunggu hasilnya.

·         Uji steril sebanyak 5% dari total tabung dan tunggu hasilnya.

G.     Pembahasan     :

       Melalui praktikum ini di buat media cair BGLB sebanyak 330ml. Media cair umumnya di gunakan untuk penyuburan. Sebelum melakukan percobaan  alat – alat harus di persiapkan terlebih dahulu dan melakukan perhitungan dan penimbangan bahan yang akan di gunakan dengan benar.

        II.          Pembuatan Media Cair EC Broth

A.      Hari/tanggal     :      Senin, 27 September 2010

B.      Judul                  :      Pembuatan Media Cair EC Broth

C.      Tujuan               :      Untuk mengetahui cara pembuatan Media Cair EC Broth

D.     Alat                    :

1.      Erlenmeyer

2.      Neraca

3.      pH stik

4.      Kapas

5.      Autoclave

6.      Tabung reaksi

7.      Tabung durham

8.      Filer pipet

9.      Hot plate

10.  Stirrer

E.      Bahan                :

1.      EC Broth

Komposisi : trypton 20,0g/l ; lactose5,0g/l ; bile salts 31,5g/l ; di-potassium phosphate 1,5g/l ; sodium chlorides 5,0g/l

2.      aquadest

F.       Cara Kerja         :

Ø  Perhitungan

          Massa EC Broth = 37 x 340 : 1000

            Massa EC Broth = 12,6 gr

Ø  Pembuatan Media

·         Neraca dinyalakan, tunggu sampai tertulis 00 pada neraca.

·         Kertas timbang ditimbang sebagai alas lalu dinol-kan.

·         Media EC Broth ditimbang sebanyak 12,6 g.

·         Dimasukkan ke dalam Erlenmeyer

·         Aquadest diukur dengan menggunakan gelas ukur sampai ukuran 340 ml.

·         Di masukkan ke dalam Erlenmeyer yang berisi media EC Broth dan diberi stirrer untuk     membantu pengadukan.

·         Erlenmeyer yang berisi larutan media diletakkan di atas hot plate untuk dipanaskan dan ditunggu sampai larutan tercampur sempurna.

·         pH larutan diukur dengan menggunakan pH stik.

·         Di masukkan ke dalam tabung reaksi dengan menggunakan filler pipet 5 ml. Kemudian ditutup dengan kapas dan masukkan ke dalam autoclave untuk disterilkan.

G.     Pembahasan    :

                        Pada pembuatan media EC Broth ada beberapa hal yang perlu diperhatikan yaitu kesterilan dan kelarutannya. Untuk mendapatkan media yang steril maka peralatan yang aquadest yang digunakan harus disterilisasi terlebih dahulu. Serta penyimpanan pun harus dilakukan dengan benar. Sedangkan untuk mendapatkan media yang larut sempurna maka harus dilakukan proses pemanasan.

    III.            Pembuatan Media Nutrient Broth

A.      Hari/Tanggal         :         Senin, 27 September 2010

B.      Judul Percobaan    :         Pembuatan Media Nutrient Broth

C.      Tujuan                    :         Agar mahasiswa mampu membuat media

                                         penyubur Nutrient Broth

D.     Alat                        :

1.      Tabung reaksi

2.      Neraca elektrik

3.      Hot plate

4.      Erlenmeyer

5.      Gelas ukur

6.      Kertas timbang

7.      Filler pipet

8.      Kapas

9.      Stirrer

E.      Bahan                     :

1.      Aquadest

2.      Nutrient Broth 2,4 gr

F.       Cara Kerja              :

Ø  Perhitungan         :

NB = 13 gram untuk 1 liter

berat NB =  185 x 13 : 1000

berat NB = 2, 405 gram

Ø  Pembuatan Media

                    ·          Pastikan neraca pada posisi rata. Pastikan dengan mengatur gelembung ke tengah

                    ·          Tekan tombol ON pada neraca dan pastikan nominalnya 0,0

                    ·          Timbang alas kertas. (hasil pengukuran 0,2 gram)

                    ·          Tekan tombol à0ß agar nominal neraca kembali 0,0

                    ·          Timbang nutrient broth hingga 2,4 gram

                    ·          Tuang aquades hingga 185 ml dalam gelas ukur skala 250 ml

                    ·          Masukkan nutrient broth yang telah ditimbang ke dalam Erlenmeyer

                    ·          Masukkan aquades yang telah diukur pada gelas ukur ke dalam Erlenmeyer

                    ·          Masukkan stirrer, atur hot plate dengan speed 26% heating 15%, panaskan nutrient broth dengan hot plate

                    ·          Gunakan filler pipet dengan mengatur terlebih dahulu dalam skala 8 ml

                    ·          Pindahkan media yang telah disedot dengan filler pipet ke tabung reaksi

                    ·          Lalu tutup tabung reaksi yang berisi Nutrient Broth dengan kapas

                    ·          Masukkan dalam autoclave 121° C ; 15 menit ; 1,5 atm

                    ·          Keluarkan. Uji 5% NB yang dibuat, masukkan dalam incubator 35-37°C, selama 24 jam

G.     Pembahasan    :

                        Melalui praktikum ini dibuat media dalam bentuk cair, yaitu media penyubur Nutrient Broth (NB) sebanyak 185 ml. NB berfungsi sebagai penyubur Escherichia Coli.

                        Sebelum dilakukan pembuatan media, pastikan perhitungan dan penimbangan yang digunakan benar. Setelah itu, baru dapat dilakukan pengerjaan dan dilakukan sterilisasi/sterilitas.

      IV.          Pembuatan Media Selenite Broth

A.        Hari /tanggal         :      Senin, 27 september 2010

B.        Judul Percobaan    :      Pembuatan Media Penyubur Selenite Broth

C.        Tujuan                    :      Membuat Media Penyubur Selenite Broth 85 ml

D.        Alat                        :

1.        Erlenmeyer steril

2.        Pipet ukur steril

3.        Bola hisap

4.        Lampu spiritus

5.        Tabung reaksi

6.        Hot plate

7.        Magnetic stirrer

8.        Timbangan elektrik

9.        Kapas

10.    Tabung reaksi steril

11.    Sendok steril

E.         Bahan                     :

1.        Selenite broth base ; typical formula, ph 7,1 ± 0,2 at 25ºC peptone 5,0 ; lactose 4,0 ; sodium phosphate 10,0

2.        Sodium biselenite

3.        aquades

F.         Cara kerja              :

Ø  Perhitungan    :

       Selenite broth base 85 ml 19 gr/l

       Massa selenite = 85 x 19 : 1000  = 1,615 gram

Ø  Sodium biselenite 85 ml 4 gr/l

            Massa sodium biselenite = 85 x 4 : 1000 = 0,34 gram

Ø  Cara Pembuatan  :

                           ·        Timbang selenite menggunakan alas timbang steri sebagai alas dengan menggunakan timbangan elektrik mencapai 1,615 gram, lalu masukkan kedalam gelas Erlenmeyer.

                           ·        Timbang sodium biselenite menggunakan timbangan elektik dengan alas timbang mencapai 0,34 gram .

                           ·        Campurkan sodium biselenite dengan selenite yang ada didalam Erlenmeyer.

                           ·        Masukkan aquadest sebanyak 85 ml kedalam gelas Erlenmeyer yang berisi selenite dan sodium biselenite

                           ·        Setelah itu larutkan selenite broth dan sodium biselenite di hotplate dengan bantuan magnetic stirrer.

                           ·        Kemudian masukkan kedalam tabung reaksi sebanyak 7 ml

                           ·        Lalu uapkan selama 10-15 menit

                           ·        Setelah itu uji steril sebanyak 5% dari total tabung.

G.        Pembahasan          :

          Selenite broth erupakan bahan yang higroskopis yaitu menyerap air dalam udara. Media selenite broth termasuk media penyubur yaitu media yang menguntungkan bagi pertumbuhan mikroorganisme tertentu karena adanya bahan-bahan tambahan yang menghambat competitor.

semoga bisa dimengerti :) Irvina P. Dewi